流式抗体品牌 流式细胞术怎么调节荧光补偿FITC/PE/PerCP/APC - 百...

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流式荧光补偿调节不对的话会怎么样

流式细胞术中荧光补偿该如何调节？

• 以FITC和PE为例来看光谱重叠。FITC单染管的荧光会部分漏到PE通道中，而这部分需要从PE通道中减掉溢漏过来的FITC荧光。

• 那么荧光补偿该如何调节呢？

• l 调节电压

• l 检测荧光通道的自发荧光

• l 每个荧光通道做单染管对照检测

• 何为单染管对照？

• l 细胞

• l 补偿微球

• 细胞通常是流式抗体单染管对照的样本首选，但是当细胞数量有限，无多余细胞用于抗体单染或感兴趣的表面抗原表达较低，阳性分群不明显不足以用来调节补偿时，建议选择补偿微球。

• 补偿调节时要注意：

• l 使用未染色的细胞做PMT的电压设置

• l 不要使用未染色的补偿微球设置电压

• eBioscience提供两种补偿微球：OneComp eBeads与UltraComp eBeads。

• 微球大小和淋巴细胞相当，可连接各种荧光标记的抗体来调节补偿。每滴微球中都含有两群：一群是可以结顷档合抗体的阳性群，一群是不会与抗体反应的阴性群。

• 优点：

• l 使用方便，一滴即可

• l 使用实验抗体与微球有效结合调节补偿，无需再用CD4分群来调节

• l 细胞替代物，适应各种孵育时间，结果稳定

• 流式细胞术中荧光补偿该如何调节？

• l 能与各种种属和亚型的抗体反应

• Product

• Species Compatibility

• Chain Recognition

• Features

• Mouse Ig

• Rat Ig

• Hamster Ig

• Rabbit Ig

• Kappa Light Chain

• Lambda Light Chain

• One Drop

• One Vial

• All cell sizes

• Violet Laser

• UltraComp eBeads 01-2222

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• OneComp eBeads 01-1111

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• Compe* X Anti-Mouse Ig, k

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• Compe* X Anti-Rat Ig, k

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• Compe* X Anti-Rat/Hamster Ig, k

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• Compe* X Plus Anti-Mouse Ig, k

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• Compe* X Plus Anti-Rat Ig, k

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• Compe* Z Anti-Mouse Bead Kit

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• 竞争品牌的微球是分种属的，使用不同抗体要购*多个产品以使用

• 注：兔来源的抗体与微球结合力较弱，但某些还是可以使用

• l 适用于各种激发光---适用于488 nm 蓝光，532 nm 绿光，561 nm 黄光，633-635 nm 红光，UltraComp eBeads尤其适用紫外 (355 nm) 或者 紫色 (405 nm) 激光器

• l 微球本身信号经过优化适合补偿调节

• l 价格相当，有小包装

• 操作步骤：

• 1. 准备好流式管，每种荧光抗体一个；

• 2. 将微球翻转或者涡顷镇旋混匀；

• 3. 在每管中加入雀乎乱一滴微球；

• 4. 在管中分别加入相应的 1 test 抗体（不同抗体 1 test 的用量不同，具体参见说明书）；

• 5. 敲击或者涡旋混匀；

• 6. 2-8℃暗处孵育 15-30 分钟；

• 7. 每管加 2ml 流式染色缓冲液，400-600 x g 离心 3-5 分钟；

• 8. 弃上清，每管加入 0.2-0.4 mL 流式染色缓冲液；

• 9. 混匀后上机分析

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流式细胞术 中荧光补偿该如何调节？以FITC和PE为例来看光谱重叠。FITC单染管的荧光会部分漏到PE通道中，而这部分需要从PE通道中减掉溢漏过来的FITC荧光。那么荧光补偿该如何调节呢？l调节电压l检测荧光通道的自发荧光l每个荧光通道做单染管对照检测何为单染管对照？l细胞l补偿微球细胞通常是流式抗体单染管对照的样本首选，但是当细胞数量有限，无多余细胞用于抗体单染或感兴趣的表面抗原表达较低，阳性分群不明显不足以用来调节补偿时，建议选择补偿微球。补偿调节时要注意：l使用未染色岁首的细胞做PMT的电压设置l不要使用未染色的补偿微球设置电压eBioscience提供两种补偿微球：OneCompeBeads与UltraCompeBeads。微球大小和淋巴细胞相当，可连接各种荧光标记的抗体来调节补偿乎汪数。每滴微球中都含有两群：一群是可以结合抗体的阳性群，一群是不会与抗体反应的阴性群。优点：l使用方便，一滴即可l使用实验抗体与微球有效结合调节补偿，无需再用CD4分群来调节l细胞替代物，适应各种孵育时间，结果稳定流式细胞术中荧光补偿该如何调节？l能与各种种属和亚型的抗体反应ProductSpeciesCompatibilityChainRecognitionFeaturesMouseIgRatIgHamsterIgRabbitIgKappaLightChainLambdaLightChainOneDropOneVialAllcellsizesVioletLaserUltraCompeBeads01-2222√√√√※√√√√√√OneCompeBeads01-1111√√√√※√√√√√Compe*XAnti-MouseIg,k√√Compe*XAnti-RatIg,k√√Compe*XAnti-Rat/HamsterIg,k√√√Compe*XPlusAnti-MouseIg,k√√Compe*XPlusAnti-RatIg,k√√Compe*ZAnti-MouseBeadKit√√√竞争品牌的微球是分种属的，使用不同抗体要购*多个产品以使用注：兔陵举来源的抗体与微球结合力较弱，但某些还是可以使用l适用于各种激发光---适用于488nm蓝光，532nm绿光，561nm黄光，633-635nm红光，UltraCompeBeads尤其适用紫外(355nm)或者紫色(405nm)激光器l微球本身信号经过优化适合补偿调节l价格相当，有小包装操作步骤：1.准备好流式管，每种荧光抗体一个；2.将微球翻转或者涡旋混匀；3.在每管中加入一滴微球；4.在管中分别加入相应的1test抗体（不同抗体1test的用量不同，具体参见说明书）；5.敲击或者涡旋混匀；6.2-8℃暗处孵育15-30分钟；7.每管加2ml流式染色 缓冲液 ，400-600xg离心3-5分钟；8.弃上清，每管加入0.2-0.4mL流式染色缓冲液；9.混匀后上机分析

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